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研究了分离自连云港海域对多种病原真菌具有抑菌作用的多粘类芽孢杆菌L1-9 菌株的抗菌蛋白性质及对农作物的防病作用,采用发酵法制备了抗菌蛋白,初步研制高效、广谱、无毒微生物农药的研制。成果通过连云港市科技局组织的技术鉴定,连科鉴字[2010]第111号,总体达到国内先进水平。
1 L1-9菌株的抑菌谱及其抑菌作用稳定性研究
采用挖孔法测定L1-9菌株发酵液对不同植物病原真菌以及细菌的抑制作用,试验结果表明:L1-9菌株发酵液对供试的18种植物病原真菌和4种细菌有较强的抗菌作用,抑菌谱较广;测定了该菌株发酵液中抗菌物质对高温,紫外线,pH,蛋白酶的稳定性,以及发酵液存放时间抗菌作用的影响,结果表明:该菌株的抑菌作用的有较强的热稳定性,对紫外线的较稳定,耐酸;经过蛋白酶K和胰蛋白酶处理后,抑菌活性为改变,说明抑菌作用对蛋白酶有较高的稳定性;且抗菌活性持续时间较长。


照片1 发酵液对细菌和病原真菌的抑制作用
2 L1-9菌株抗菌蛋白的分离与纯化
通过硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow柱层析、Sephadex G-200 柱层析,以小麦蠕孢病菌和金黄色葡萄球菌为指示菌采用抑菌活性追踪和SDS-PAGE 跟踪检测,从分离自连云港海域对多种病原真菌具有抑菌作用的多粘类芽孢杆菌L1-9 菌株发酵液中分离纯化到一种对金黄色葡萄球菌和小麦蠕孢病菌的菌丝生长及孢子萌发具有抑制作用的抗菌蛋白,分子量约31kD。
3 L1-9菌株对番茄早疫病的抑菌防病作用
采用平板对峙法和打孔法测定L1-9菌株及其发酵液和无菌发酵液对番茄早疫病菌的抑制作用,结果表明:L1-9菌株和无菌发酵液对番茄早疫病菌菌丝生长有明显的抑制作用,培养4 d的抑菌带宽度分别达到
结果表明:L1-9菌株的发酵液和无菌发酵液对番茄早疫病具有较好的防治效果,发酵液的防病效果高于无菌发酵液,其离体叶片法的保护效果和治疗效果分别达到了79.28 %和67.20 %。


照片2
4 海洋细菌L1-9菌株对小麦的促生防病作用研究
采用平板对峙法和打孔法测定了海洋细菌L1-9菌株对小麦根腐叶枯病菌和小麦赤霉病菌的抑制作用,结果表明:L1-9菌株和无菌发酵液对两种病原真菌菌丝生长和分生孢子萌发有明显的抑制作用;种子发芽试验和盆栽试验结果表明:L1-9菌株发酵液和无菌发酵液处理小麦种子后,能提高小麦种子的发芽率、发芽势、出苗率以及小麦幼苗的株高、根长、干重,促进小麦幼苗的生长,对小麦麦根腐叶枯病和小麦赤霉病具有较好的防病效果,发酵液的抑菌防病作用高于无菌发酵液,防病效果分别达到了82.00%和73.84%。


照片4 粉剂对黄瓜种子发芽影响

照片5 菌剂对大豆根系生长的促进作用